Test de paternité ADN avec PCR

Pour effectuer un test de paternité ADN, nous devons d'abord récolter les échantillons d'ADN de la mère, de l'enfant et du père présumé. Il n'est pas indispensable de tester la mère, mais ce la donnera des résultats plus concluants à la fin. On utilise les cellules épithéliales de la bouche. Une fois que nous avons reçu les échantillons dans notre laboratoire, le processus du test peut commencer. La technologie que nous utilisons le plus souvent est la réaction en chaîne de la polymérase ou PCR en combinaison avec le système IdentifilerTM pour l'analyse. D'abord nous isolons l'ADN pur de l'échantillon en retirant toutes les protéines et autres éléments qui peuvent se trouver à l'intérieur d'une cellule.

L'ADN est alors placé dans un thermocycleur avec 16 amorces fluorescentes pour des "loci" spécifiques, endroits de l'ADN qui permettront au système Identifiler de localiser des fragments spécifiques de l'ADN. Le thermocycleur est programmé pour effectuer un certain nombre de cycles de température. Au long de ces cycles, les amorces trouvent les zones spécifiques de l'ADN qui sont répétées et elles les amplifient. Après que l'ADN a été amplifié, il est placé dans un analyseur génétique ABI Prism pour une électrophorèse capillaire. Dans ce processus les loci de l'ADN sont cartographiés et les données de chacun sont recueillies. Cela aboutit à un "profil" complet de chaque individu. Ces profils individuels sont alors étudiés par un titulaire de doctorat formé et expérimenté.

A ce moment, à chaque concordance entre les individus testés est assignée une probabilité, un Indice de Paternité (IP). Chaque IP est calculé, et multiplié avec les autres pour établir un Indice de Probabilité Combiné (IPC). Cela apparaîtra sur le rapport et établira la vraisemblance d'une correspondance génétique. La probabilité de paternité doit être égale ou supérieure à 99% pour que le test soit considéré comme concluant. Si le père présumé ne correspond pas à l'enfant, il lui est attribué un IP de zéro, signifiant qu'il ne peut pas être le père biologique de l'enfant (exclusion). Nous devons trouver au moins trois loci ne présentant pas de correspondance pour affirmer que le père présumé n'est pas le père biologique de l'enfant testé.

Autres méthodes de test de paternité ADN utilisées

Pour affirmer que la probabilité de paternité est égale ou supérieure à 99%, dans un petit nombre de cas il faudra des tests supplémentaires pour fournir une conclusion. Une méthode supplémentaire de test est l'amplification de PCR en utilisant une analyse aux sels d'argent. Après la même technique d'isolation de l'ADN que le système PCR/Identifiler, l'ADN isolé est amplifié avec 7 amorces supplémentaires. Une fois que les échantillons ont achevé le processus d'amplification, ils sont placés dans un gel avec un courant électrique et seront éventuellement colorés par une teinture d'argent pour les rendre visibles. Les nombres d'IP supplémentaires obtenus par la méthode PCR/argent peuvent alors être multipliés avec s nombres d'IP du système PCR/Identifiler pour donner un IPC acceptable (égal ou supérieur à 99%). Si le test supplémentaire PCR/sels d'argent ne donne pas une probabilité de paternité supérieure à 99%, le RFLP ou Polymorphisme de restriction peut être utilisé pour fournir jusqu'à 8 sondes supplémentaires.